一、加樣步驟
在中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上強烈振蕩。制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清天然凝固、血kuai收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液,再在其加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。一般說來,在5天內測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存??捎米鳒y定的標本十分廣泛,體液、分泌物和排泄物等均可作標本以測定其中某種抗體 或抗原成份,試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保留。
二、固相載體
的操縱因固相載體的形成不同而有所差異,海內醫(yī)學檢修一般均用板式點。除特殊情況外,在醫(yī)學檢修中均以血清作為檢測標本。加酶結合物應用液和底物用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。每次加標本應更換吸嘴,以發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。的試劑,良好的儀器和準確的操縱是保證試劑盒檢測結果正確可靠的必要條件。頂用的蒸餾 水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的。有些標本可直接進行測定,有些則需經預處理。
三、標本因素
血清標本可按常規(guī)方法采集,應留意避免溶血,紅細胞溶解時會開釋出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。如在冰箱中保留過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法中可使本底加深。本文將敘述板式各個操縱步驟的留意要點,珠式、管式及磁性球,國外試劑均與特殊儀器配合應用,嚴格遵照劃定操縱,必能得出正確的結果。加樣時應將所加物加在板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留意不可濺出,不可產氣憤泡。有此測定需用稀的血清,可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣。